Millipore超濾管價格丨經(jīng)銷商現(xiàn)貨

    在蛋白純化、抗體濃縮、核酸制備等生物實驗中，經(jīng)常需要面對這樣的場景：純化后的蛋白溶液體積太大、濃度太低，無法直接用于下游實驗；或者樣品中的鹽分過高、緩沖體系不合適，需要更換溶液環(huán)境。傳統(tǒng)透析法雖然經(jīng)典，但耗時長、操作繁瑣，且容易造成樣品稀釋。

    Millipore（默克密理博）旗下AmiconUltra系列超濾管，正是為解決上述痛點而設(shè)計的一款離心式超濾裝置。它利用離心力驅(qū)動，通過精準(zhǔn)截留的超濾膜，在數(shù)十分鐘內(nèi)即可完成樣品的濃縮、脫鹽和緩沖液置換，回收率高、操作簡便，成為許多實驗室處理生物樣品的日常裝備。

    本文將從產(chǎn)品規(guī)格、工作原理、選型指南、標(biāo)準(zhǔn)操作、應(yīng)用場景以及常見問題等維度，系統(tǒng)梳理Millipore超濾管的核心知識，幫助實驗人員在日常操作中更高效地使用這一工具。

一、先看產(chǎn)品概覽：四種體積、五種截留規(guī)格

    在深入了解使用細(xì)節(jié)之前，先對Millipore超濾管的產(chǎn)品規(guī)格做一個整體認(rèn)知。AmiconUltra超濾管提供四種樣本體積規(guī)格：0.5mL、2mL、4mL和15mL。每種體積規(guī)格均包含五種標(biāo)稱截留分子量（NMWL）：3kDa、10kDa、30kDa、50kDa和100kDa。

    不同體積型號的核心參數(shù)如下：AmiconUltra-0.5最大上樣體積為0.5mL，濃縮產(chǎn)物終體積約15至20μL，滯留體積小于1μL。AmiconUltra-4最大上樣體積為4mL，濃縮產(chǎn)物終體積約30至70μL。AmiconUltra-15最大上樣體積為15mL（使用擺桶轉(zhuǎn)子）或12mL（使用固定角度轉(zhuǎn)子），濃縮產(chǎn)物終體積約150至300μL。

    所有型號均內(nèi)置低吸附的Ultracel-PL再生纖維素超濾膜，回收率通常超過90%，濃縮倍數(shù)可達(dá)數(shù)十倍——AmiconUltra-0.5約30倍，AmiconUltra-4和Ultra-15可達(dá)80倍。根據(jù)標(biāo)稱分子量限值的不同，典型離心時間為10至60分鐘不等。

二、工作原理：膜分離+離心驅(qū)動，數(shù)十分鐘完成濃縮

    核心原理：基于分子大小的篩分

    Millipore超濾管的工作原理并不復(fù)雜。其核心組件是具有精準(zhǔn)孔徑的超濾膜，膜孔徑通常以“分子量截留值（MWCO）"標(biāo)注，可精準(zhǔn)截留特定分子量以上的生物大分子（如蛋白質(zhì)、核酸、病毒顆粒等），而小分子雜質(zhì)（如緩沖液鹽類、小分子代謝物）則能通過膜孔。

    在離心力的驅(qū)動下，溶液中的小分子溶質(zhì)和溶劑透過超濾膜，被收集在濾過液收集管中；而大分子物質(zhì)則被超濾膜截留在樣品濃縮管內(nèi)。這一“膜分離+離心驅(qū)動"的雙重機制，使Millipore超濾管兼具操作簡便和濾過速度快的特點。

    垂直膜設(shè)計：減少濃差極化，加快離心速度

    值得留意的是，AmiconUltra系列采用了垂直結(jié)構(gòu)的膜設(shè)計。這種設(shè)計能夠降低溶質(zhì)極化造成的濾膜結(jié)垢，加快離心速度——整個離心操作大約只需10至30分鐘。

    溶質(zhì)極化是超濾過程中的常見問題：大分子在膜表面堆積形成“凝膠層"，阻礙后續(xù)小分子通過，導(dǎo)致流速不斷下降。垂直膜設(shè)計使溶液在離心過程中形成切向流動，持續(xù)沖刷膜表面，減少了這一現(xiàn)象的發(fā)生，從而保證了較快的處理速度和較高的回收率。

    死體積設(shè)計：防止過度離心，避免樣品干涸

    死體積設(shè)計是Millipore超濾管的另一個實用細(xì)節(jié)。在離心過程中，超濾管不會將樣品離干——總會有少量溶液殘留在濾管中。Amicon15的死體積約200μL，Amicon4約50μL，Amicon0.5約10至20μL。

    這一設(shè)計有效防止了過度離心使樣本干涸而造成樣本損失，也便于實驗人員估計和控制樣品濃縮倍數(shù)。

    選型指南：如何選擇適合自己實驗的超濾管

    面對四種體積、五種截留分子量的產(chǎn)品矩陣，Millipore超濾管的選型需要綜合考慮樣品體積、目標(biāo)分子大小和樣品濃度三個因素。

三、根據(jù)樣品體積選型號

    這是選型中較直觀的一步。如果起始樣品體積在500μL以下，選擇AmiconUltra-0.5。如果起始樣品體積在4mL以下，選擇AmiconUltra-4。如果起始樣品體積在15mL以下，選擇AmiconUltra-15（使用擺桶轉(zhuǎn)子時為15mL，固定角度轉(zhuǎn)子時為12mL）。對于體積介于上述規(guī)格之間的樣品，可多次加樣、分步濃縮。

    根據(jù)截留分子量選規(guī)格——1/2或1/3原則

    這是選型中較為關(guān)鍵的一步。Millipore超濾管選型的核心原則是：所選超濾管的截留分子量（NMWL）應(yīng)至少為目標(biāo)蛋白分子量的1/2或1/3。

    例如，若要濃縮分子量為60kDa的BSA，建議選擇30kDa截留分子量的超濾管；若濃縮分子量為150kDa的IgG抗體，30kDa或50kDa均可滿足需求。

    這一原則背后的邏輯是：如果截留分子量選擇過大，目標(biāo)蛋白可能部分透過膜而流失；如果截留分子量選擇過小，雖然截留效果好，但離心時間會顯著延長，甚至可能因膜孔過小而截留住一些本應(yīng)通過的小分子雜質(zhì)。

    膜材質(zhì)的選擇：Ultracel與Biomax

    Millipore超濾管主要使用兩種膜材質(zhì)，適用于不同的樣品類型：

    Ultracel再生纖維素膜適用于稀溶液的濃縮或脫鹽，對蛋白質(zhì)、DNA等大分子有較低的吸附率。大多數(shù)AmiconUltra超濾管均采用Ultracel-PL再生纖維素膜。

    Biomax聚醚砜（PES）膜適用于濃度更高、樣品量更大的樣品（如血清、血漿或條件性組織培養(yǎng)基）。若樣品蛋白濃度大于1.0mg/mL，Biomax膜可能更合適。

四、不同應(yīng)用場景的選型參考

    以下是一些常見應(yīng)用場景的選型參考：

    抗體濃縮：以IgG（約150kDa）為例，推薦使用30kDa截留分子量的超濾管。使用AmiconUltra-1530kDa裝置，在吊桶式轉(zhuǎn)子中4000×g離心10至20分鐘，或固定角轉(zhuǎn)子中5000×g離心，即可將抗體濃縮至所需濃度。免疫球蛋白回收率可達(dá)99%。

    慢病毒濃縮：推薦使用100kDa截留分子量。

    腺病毒濃縮：推薦使用50kDa截留分子量。

    外泌體純化與濃縮：外泌體直徑約30至100nm，Millipore超濾管可用于外泌體的濃縮及純化。

    核苷酸濃縮與純化：推薦使用30kDa截留分子量，在核苷酸得率和超濾時間上取得較好的平衡。

    標(biāo)準(zhǔn)操作流程：濃縮、脫鹽與緩沖液置換

五、濃縮操作步驟

    以AmiconUltra-15為例，標(biāo)準(zhǔn)濃縮操作步驟如下：

    預(yù)清洗方面，新超濾管的超濾膜上含有痕量甘油作為保濕劑。多數(shù)情況下無需預(yù)處理，可直接加樣使用。若甘油可能干擾后續(xù)分析，可用緩沖液或Milli-Q水進(jìn)行預(yù)清洗。如果干擾仍然存在，可用0.1NNaOH潤濕，再用緩沖液或Milli-Q水清洗至中性。

    加樣時，向超濾離心管加入不超過15mL的樣本（若使用定角轉(zhuǎn)子則為12mL）。將蓋好蓋子的超濾離心管放入離心轉(zhuǎn)子中，用一個類似重量或體積的平衡管配平。

    離心條件方面，若使用擺桶轉(zhuǎn)子，以最大4000×g離心約15至60分鐘。若使用定角轉(zhuǎn)子，使超濾內(nèi)管的膜面朝上，對于3K、10K、30K和50K的超濾管以最大7500×g離心約10至40分鐘；對于100K的超濾管以最大5000×g離心約15至60分鐘。

    回收濃縮產(chǎn)物時，將移液管或槍頭插入超濾離心管內(nèi)管，左右移動著吸取樣本，以確?；厥?。

    脫鹽與緩沖液置換操作

    脫鹽和緩沖液置換的操作思路是“濃縮—稀釋—再濃縮"的循環(huán)。

    具體操作：先按上述方法將樣品濃縮至1mL左右。向濃縮液中加入所需的新緩沖液，恢復(fù)至樣品原始體積（或適當(dāng)體積）。再次離心濃縮至目標(biāo)體積。重復(fù)上述步驟2至3次，通常即可完成緩沖液的有效置換，置換效率可達(dá)99%以上。

    每輪置換的稀釋倍數(shù)越大，所需循環(huán)次數(shù)越少。一般推薦每次至少稀釋10倍，連續(xù)進(jìn)行三次置換，即可將原緩沖液組分降低至可忽略的水平。

    反轉(zhuǎn)離心回收——針對小體積樣品

    對于0.5mL和2mL的超濾管，Millipore提供了反轉(zhuǎn)離心回收方式。濃縮完成后，將內(nèi)管倒置放入一個新的收集管中，以較低轉(zhuǎn)速（約1000×g）離心，濃縮液即可從膜上反轉(zhuǎn)回收至收集管中。這種方式尤其適合處理體積較小的珍貴樣品，能夠減少槍頭吸取造成的樣品丟失。

六、應(yīng)用領(lǐng)域：不止于蛋白質(zhì)濃縮

    Millipore超濾管的應(yīng)用場景相當(dāng)廣泛，主要包括：

    生物大分子樣品濃縮、脫鹽及緩沖液置換；抗體的快速濃縮；蛋白質(zhì)和核酸的純化；游離標(biāo)記物的去除；血清多肽生物標(biāo)志物的純化；病毒顆粒的濃縮；雙向電泳蛋白樣品制備；樣品去垢劑的去除；從瓊脂糖凝膠中回收DNA等。

    使用注意事項：細(xì)節(jié)決定回收率

    膜一旦潤濕，務(wù)必保持濕潤

    膜經(jīng)潤濕后，一定要保持膜的濕潤狀態(tài)，防止膜干燥，否則將影響超濾效果。若暫時不繼續(xù)操作，可用封口膜密封后暫存。

    離心力不宜過高

    超濾管的設(shè)計可承受一定的最大離心力。以AmiconUltra-15為例，擺桶轉(zhuǎn)子最大4000×g，定角轉(zhuǎn)子最大7500×g（3K至50K）或5000×g（100K）。超過推薦離心力可能導(dǎo)致超濾膜破裂或裝置損壞。

    化學(xué)兼容性

    Millipore超濾管適用于一般的水溶液或生物學(xué)樣品。對于再生纖維素膜，可耐受的pH范圍為3至13。與70%乙醇兼容，但不可以使用高壓高溫滅菌。

    一次性使用

    所有離心超濾管均為一次性產(chǎn)品，不推薦重復(fù)使用。重復(fù)使用可能導(dǎo)致膜性能下降、交叉污染或密封失效。

    常見問題速查

    問：離心時間過長，膜會變干嗎？答：不會。Millipore超濾管設(shè)計有死體積，總會有少量溶液殘留在濾管中，防止膜干燥。

    問：為什么我的樣品流速很慢？答：多種原因可能導(dǎo)致此結(jié)果：蛋白濃度越高，所需離心時間越長；離心速度越低，時間越長；低溫下所需離心時間高于常溫；溶液中若含有去垢劑，去垢劑可能形成微球，分子量顯著增大，影響流速。

    問：可以用Millipore超濾管分離兩種蛋白嗎？答：可以，但按照經(jīng)驗，兩種蛋白的分子量需相差一個數(shù)量級（10倍）以上，才能有效分離。

    問：Millipore超濾管不含RNA酶嗎？答：不保證不含RNA酶。如有需要，可用0.1%DEPC在37℃浸泡2小時以滅活RNA酶，殘留DEPC用Milli-Q超純水洗滌除去。

總結(jié)

    Millipore超濾管的核心特點可歸納為以下幾點：四種體積（0.5mL、2mL、4mL、15mL）覆蓋從微量到中等體積的樣品處理需求；五種截留分子量（3K、10K、30K、50K、100K）適配不同大小的目標(biāo)分子；Ultracel再生纖維素膜非特異吸附較低，回收率通常超過90%；垂直膜設(shè)計和死體積設(shè)計兼顧了離心速度與樣品保護(hù)；離心驅(qū)動操作簡便，無需復(fù)雜設(shè)備。

    選型時記住“1/2或1/3原則"——所選截留分子量應(yīng)至少為目標(biāo)蛋白分子量的1/2或1/3。操作時注意膜一旦潤濕需保持濕潤，離心力不宜超過推薦值，超濾管為一次性使用。

    在日常實驗中，Millipore超濾管能夠幫助實驗人員快速、高效地完成樣品的濃縮、脫鹽和緩沖液置換，是蛋白純化和樣品制備環(huán)節(jié)中值得信賴的工具。

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